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淺談液相分析中如何選擇液相色譜柱

更新時間:2022-06-24 點(diǎn)擊次數(shù):1582

俗話說的好:“磨刀不誤砍柴工,工欲善其事,必先利其器"??梢哉f,色譜柱是色譜分析過程中最重要的部分,相當(dāng)于人體的“心臟"。根據(jù)自己要分析的樣品去選擇合適的液相色譜柱,需要考慮不同參數(shù)將會造成什么影響。比如色譜柱尺寸:柱長、內(nèi)徑;色譜柱填料:粒徑、孔徑、比表面積、基質(zhì)及其表面特征、載碳量鍵合相類型。

在日常液相分析中,正確選擇適合自己實(shí)驗(yàn)的色譜柱,將會使得你的實(shí)驗(yàn)事半功倍!今天小編就在這里淺談液相分析中如何選擇液相色譜柱。

色譜柱參數(shù)--- 柱長

兩支同填料的色譜柱,柱長越長,分離時間越長,但柱越長分離度將會更好,同時柱壓也將更大,可結(jié)合樣品的復(fù)雜性和希望的分離時間來選擇合適的柱長,一般為2.0~250mm。

色譜柱參數(shù)--- 內(nèi)徑

窄徑柱可提高柱的靈敏度,并可明顯降低溶劑的使用量;

寬徑柱可以將系統(tǒng)死體積的影響降到zui低,載樣量高,抗污染。

色譜柱參數(shù)--- 粒徑

例如:1.8μm、3μm、5μm、10μm等,粒徑越小,分離越快,柱效越高。但柱壓力越高,柱容易被污染,壽命低。

色譜柱參數(shù)--- 孔徑

孔徑小,含孔率高,則比表面積大,載碳量高。

色譜柱參數(shù)--- 比表面積

例如:180㎡/g、320㎡/g等(Ultimate系列為320㎡/g),選擇適合目標(biāo)物的比表面積,每克填料的表面積(與粒度、含孔率有關(guān)),比表面積大,會增加樣品與鍵合相之間的反應(yīng),增加保留、載樣量增加,比表面積小可以縮短分析時間和梯度時的平衡時間。

色譜柱參數(shù)--- 載碳量

例如:10%、14%、17%、23%等,載碳量通常影響選擇性。硅膠表面鍵合相的比例,與比表面積,鍵合覆蓋度等有關(guān)。載碳量高,則保留增加,適合分析非極性化合物。制備色譜的上樣量也可以增加。

色譜柱參數(shù)--- 硅膠基質(zhì)

1. 硅膠基質(zhì)色譜柱較其他材料制成的柱子有更高的柱效;

2. 硅膠機(jī)械強(qiáng)度好;

3. 硅膠表面可化學(xué)修飾制成具有各種官能團(tuán)的鍵合相;

4. 硅膠填料不會發(fā)生體積的變化;

5. 硅膠在高pH值下會溶解;

6. 硅膠表面酸性,在分離堿性化合物時容易產(chǎn)生拖尾。

色譜柱參數(shù)--- 聚合物基質(zhì)填料

1. 交聯(lián)苯乙烯/二乙烯基苯、甲ji苯烯酸酯等;

2. pH穩(wěn)定性好:pH1-14;

3. 可以在很寬的范圍內(nèi)進(jìn)行表面化學(xué)處理以滿足反相色譜、離子交換色譜、疏水作用色譜和體積排阻色譜的需求;

4. 在中等pH條件下對強(qiáng)堿性物質(zhì)具有更好的峰形;

5. 填料的體積隨著流動相的不同而改變,如膨脹或收縮;

6. 分離效率相對硅膠而言比較低;

7. 重現(xiàn)性不好;

8. 機(jī)械強(qiáng)度差。

色譜柱參數(shù) --- 硅醇基

硅醇基的酸性較大,可與堿性化合物由于靜電作用力而牢固的結(jié)合,因此含有較多殘留硅醇基的填料在分離堿性化合物時容易產(chǎn)生拖尾、變寬、保留延長等現(xiàn)象。

如何屏蔽剩余硅羥基的影響:加入適當(dāng)?shù)膾呶矂┤缛野房梢匝诒螝埩舻墓枇u基,使堿性化合物峰形變好;降低流動相pH值小于3,可以減小硅醇基的反應(yīng),從而減小拖尾現(xiàn)象?;蛘哌x擇優(yōu)先使用雙封尾的色譜柱。

色譜柱參數(shù) --- 封尾

圖片

為了降低硅醇基的影響,需要對色譜柱進(jìn)行封尾,通常為鍵合填料與小硅烷(如:三甲基硅烷)進(jìn)行后續(xù)反應(yīng),屏蔽掉部分殘留硅醇基。

封尾的目的:1.屏蔽殘留的硅醇基;2.改善選擇性。

色譜柱參數(shù) --- 鍵合相的分類

鍵合相:反相(70%);C18(65%);C8(15%);Cyano(5%);苯基柱(<5%);正相(20%;硅膠、-NH2、-CN);其它(10% ;手性柱、離子交換柱)。 

同一廠家相同硅膠基質(zhì)的反相柱:保留值隨著碳載量的增加而增加;鍵合碳鏈越長,保留越大,C18≈C8>C4>C1,長鏈之間差異不大,根據(jù)待分析物質(zhì)的性質(zhì),選擇合適的鍵合相和分離模式。

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