一般地說,根據(jù)樣品的性質(zhì)決定采用何種液相色譜方法,然后再選擇不同類型的柱。即不同類型的柱則代表了不同的色譜方法。
不同種類色譜柱的差異在于柱結(jié)構(gòu)、柱填料和柱尺寸的不同。
色譜柱 有不同的尺寸(長度和內(nèi)徑),分制備型、常規(guī)分析型和微型。不同類型柱的硬件也不同,(包括接頭、柱管等方面),還有徑向加壓柱和夾套加熱柱等。
不同液相色譜法的尺寸根據(jù)需要可以選取,普通分析3~30cm長,內(nèi)徑4~8mm。常用20cm長、4.6mm內(nèi)徑的柱。制備型柱內(nèi)徑一般為8mm、25cm長。微型柱內(nèi)徑l~3mm,長10~20cm。不同的填料分析的效果可能不同,這是因?yàn)樯a(chǎn)過程不同所致。同一廠商生產(chǎn)的同種填料因批號(hào)不同也會(huì)有差異,這種差異可能從基質(zhì)就開始(表面積、雜質(zhì)、特殊處理),還有鍵合的化學(xué)物質(zhì)(一氯或三氯硅烷反應(yīng)劑),不同廠家生產(chǎn)的填料還會(huì)因**技術(shù)(預(yù)處理、鍵合過程、填裝技術(shù))等不同而呈現(xiàn)較大差異。由于種種差異、僅能假設(shè)同一批號(hào)的柱有基本相同的性質(zhì)。
多數(shù)柱填料基質(zhì)采用多孔硅膠微粒,通常有球形和無定形兩種,具有不同的粒度、孔徑和表面積。多孔聚合物微粒也適用于反相色譜。聚合物柱的流動(dòng)相范圍廣,流動(dòng)相pH值可在1至13之間。而硅膠基質(zhì)pH僅能在2.5和7之間。顯然,聚合物柱要好一些,但目前仍是以硅膠基質(zhì)的柱為主。原則上,聚合物柱可以克服硅膠基質(zhì)柱的某些不足,但需要大量的實(shí)驗(yàn)來證實(shí),要進(jìn)一步考查聚合物基質(zhì)填料的全面*性。
在實(shí)際工作中,選擇性能良好的 色譜柱 可得到好的結(jié)果,首先要注意柱徑、長度、填料種類和填料粒度。